高效液相色谱异常峰的原因及解决办法

 

高效液相色谱法(HPLC)是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。

液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

下面给大家提供一些解决异常峰的办法。

01
峰拖尾

原因

1)筛板阻塞;

2)色谱柱塌陷;

3)干扰峰;

4)流动相pH选择错误;

5)样品与填料表面的溶化点发生反应;

解决办法

1)反冲色谱柱或更换进口筛板;

2)填充色谱柱或更换色谱柱;

3)改变流动相或更换更长色谱柱;

4)调整pH值,对于碱性化合物,低pH值更有利于得到对称峰;

5)加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱。

02

基线漂移

原因

1)柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器);

2)流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移);

3)流通池被污染或有气体;

4)检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)

5) 流动相配比不当或流速变化。

6)柱平衡慢,特别是流动相发生变化时。

7)流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

8)样品中有强保留的物质(高k’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。

9)使用循环溶剂。未调整检测器。

10)检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决办法

1)控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。

2)使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用在线脱气或氦气脱气。

3)用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池,如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

4)取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5)更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6)用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10~20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。

7)检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

8)改变分析条件。使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

9)重新设定基线。使用新的流动相。

10)将波长调整至最大吸收波长处。重选检测波长。

03

出现鬼峰

原因

1) 进样阀残余峰;

2)样品中未知物;

3)柱未平衡;

4)三氟乙酸氧化;

5)水污染(反相)。

解决办法

1)每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗;

2)处理样品;

3)重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱);

4)每天新配,用抗氧化剂;

5)通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水。

04

所有的峰面积都太小

原因

1)检测器衰减设定过高;

2)检测器时间常数设定太大;

3)进样量太少;

4)记录仪连接不当。

解决办法

1)减少衰减的设定;

2)设定较小的时间常数;

3)增大进样量;

4)使用正确的连接。

05

所有峰面积都太大

原因

1)检测器衰减设定过低;

2) 进样过多;

3)记录仪连接不正确。

解决办法

1)采取较大的衰减;